ADN RECOMBINANTE EN LA NATURALEZA

Los virus transfieren ADN entre bacterias y entre especies eucariotas, transfieren su material genético durante la infección. Dentro de la célula infectada, los genes se replican y dirigen la síntesis de proteínas virales. Los genes replicados y las nuevas proteínas virales se ensamblan dentro de la célula y forman nuevos virus que,  son liberados para infectar a otras células. Durante muchas infecciones virales, las secuencias del ADN viral se incorpora a uno de los cromosomas de la célula huésped. Este ADN puede permanecer ahí durante días, meses o incluso años. Cuando se producen nuevos virus a partir del ADN incorporado, estos pueden integrar por error genes humanos en el genoma del virus.           

                                                          BIBLIOGRAFIA                                                                            

PRUEBAS MOLECULARES PARA FIBROSIS QUISTICA

Se extrajo ADN de sangre venosa periférica utilizando el método modificado de salting out16 y previa cuantificación de su concentración a 3ng/ul; se guardó el material genético obtenido (ADN) a menos 20°C. Posteriormente, y previa amplificación enzimática o PCR (Polimerase Chain Reaction) de los ADNs, se estudió el gen CFTR por medio de la técnica de heterodúplex para identificar la mutación ∆F508. En los pacientes  homocigotos para  esta mutación se dió por concluido el estudio, mientras que los pacientes que no tuvieron en su genotipo uno o ambos alelos con esta mutación (∆F508) pasaron a la siguiente fase del estudio. En esta etapa se analizaron los ADNs por medio de una técnica de hibridación reversa in situ (test INNO-LiPA CFTR 29+Tn) que identifica las mutaciones.

BIBLIOGRAFIA

MECANISMOS GENÉTICOS MOLECULARES DE LA FIBROSIS QUISTICA

Se han sugerido cinco mecanismos moleculares por los que una mutación produciría una disfunción del canal CFTR: las mutaciones clase I y II suelen asociarse con insuficiencia pancreática (las mutaciones de clase I conducen a una ausencia en la producción de CFTR, y las de clase II no permiten que la proteína alcance la membrana epitelial), mientras que las otras tres clases de mutaciones (III, IV y V) presentan una gran variabilidad en su expresión clínica.

• Mutaciones de Clase I: No producción de la proteína CFTR (la más común: G542X).
• Mutaciones de Clase II: Procesamiento defectuoso de la proteína (DF508, NN1303K,..).
• Mutaciones de Clase III: Regulación defectuosa de canal de cloro (G551D).
• Mutaciones de Clase IV: Transporte defectuoso de la corriente de Cl- (R117H, R334W,...).
• Mutaciones de Clase V: Reducción de la síntesis de ARNm.

BIBLIOGRAFIA

PCR RELACIONADO CON FIBROSIS QUISTICA PULMONAR

El análisis de las mutaciones del CFTR se realizó mediante PCR por 3 métodos: 1) heterodúplex; 2) restricción enzimática y 3) mutagénesis dirigida y restricción enzimática. Las mutaciones analizadas fueron p.PHE508del, p.Gly542X, p.Asn1303Lys, p.Trp1282X, P.Gly551Asp, p.Arg553X, p.Arg1162X, p.Arg334Trp y p.Ile507del, agrupándose en las diferentes clases (I, II, III, IV y V) según el criterio funcional antes mencionado, de modo de obtener dos poblaciones homogéneas para su posterior comparación.

BIBLIOGRAFIA